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共聚焦显微镜的自发荧光

作者:上海豫光 来源:未知 日期: 2012-05-17 11:05:06
导读:当组织进行图像采集时,自发荧光可能是背底增加的一个主要原因。自然情况下,多种细胞可产生自发荧光。在酵母菌细胞和植物细胞,可看到红色的绿叶素荧光。另外,…
            当组织进行图像采集时,自发荧光可能是背底增加的一个主要原因。自然情况下,多种细胞可产生自发荧光。在酵母菌细胞和植物细胞,可看到红色的绿叶素荧光。另外,某些试剂,尤其是戊二醛固定剂可能是自发荧光的来源,但经氢硼化物处理后,其自发荧光可降低或消除。使用超出自发荧光激发光波长范围的激发光可消除自发荧光,为避免短波长自发荧光的干扰,常选用Cy5的长波长进行激发。通过使用不同波长的激光激发未染色的标本,可评估标本自发荧光的量,注意设定光电倍增管的增益和背底水平以及激光的功率。自发荧光可通过高强度激光快闪作用进行光漂白,将标本完全暴露于水银灯的光照中也有同样的效果。更复杂的处理自发荧光的方法是进行时间分辨荧光成像。自发荧光也可通过图像提取技术加以减除,尽管自发荧光在进行图像采集时常常会带来问题,但在进行多标记显示时,也可利用组织的自发荧光来显示完整的细胞形态。
 
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