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共聚焦显微镜的标本制备及图像采集

作者:上海豫光 来源:未知 日期: 2012-05-16 15:57:59
导读:许多用于共聚焦显微镜的实验技术方法,多以普通光学显微镜为基础,必要时进行改进以适合共聚焦显微镜的需要。对于普通显微镜,主要方法是降低焦点以外的荧光干扰…
            许多用于共聚焦显微镜的实验技术方法,多以普通光学显微镜为基础,必要时进行改进以适合共聚焦显微镜的需要。对于普通显微镜,主要方法是降低焦点以外的荧光干扰。与普通光学显微镜相比,共聚焦显微镜可进行厚标本深部的荧光观察,对标本的染色要求染色的时间较长或荧光探针的浓度较高,这对于普通光学显微镜可能造成染色过度,而无法分辨其细节。
       激光能穿越较厚的标本这一问题解决后,可用普通切片机切出较厚的切片,可也用振动切片机制备活体脑组织切片,在激光扫描共聚焦显微镜下,可获得良好的标记效果。为了观察标本深部也可将标本从切片取下,使其颠倒后再贴到切片上进行观察,从两个方向观察标本。也可用长波长激发的荧光染料,来标记标本较深部位的物质,而不用短波长激发的荧光染料标记,与短波长荧光染料标记的图像相比,其分辨率略有降低,但却获得了较强的穿透力,多光子激光扫描共聚焦显微镜,因为采用了红光作为激发光,则有利于从标本的深部采集图像。
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