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共聚焦显微镜的原理

作者:上海豫光 来源:未知 日期: 2012-05-03 17:40:37
导读:传统的光学显微镜使用的实际上是场光源,由于光散射,在所观察的视野内,样品上的每一点都同时被照射并成像,入射光照射到整个细胞的一定厚度,位于焦平面外的反…
       传统的光学显微镜使用的实际上是场光源,由于光散射,在所观察的视野内,样品上的每一点都同时被照射并成像,入射光照射到整个细胞的一定厚度,位于焦平面外的反射光也可通过物镜而成像,使图像的信噪比降低,影响了图像的清晰度和分辨率。此外,传统的光学显微镜也只能对局部做平面成像。激光扫描共聚焦显微镜脱离了这种模式,采用激光束做光源,激光束经照明针孔,经由分光镜反射至物镜,并聚焦于样品上,对标本内焦平面上每一点进行扫描。然后,激发出的荧光经原来入射光路直接反向回到分光镜,通过探测针孔时先聚焦,聚焦后的光被光电倍增管探测收集,并将信号输送到计算机,在彩色显示器上显示图像。在这个光路中,只有在焦平面上的光才能穿过探测针孔,焦平面以外区域射来的光线在探测小孔平面是离焦的,不能通过小孔。因此,非观察点的背景呈黑色,反差增加,成像清晰。
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